themoralbrain

Gerichte antilichaamblokkering door een dubbelfunctioneel

Gerichte antilichaamblokkering door een dubbelfunctioneel conjugaat van antigene peptide en Fc-III-mimetica (DCAF).

Eliminatie van schadelijke antilichamen uit organismen is een waardevolle benadering voor de interventie van met antilichamen geassocieerde ziekten, zoals Dengue hemorragische koorts en auto-immuunziekten . Aangezien duizenden antilichamen met verschillende epitopen in het bloed circuleren, is er geen universele methode, behalve het dubbelfunctionele conjugaat van antigeen peptide en Fc-III-mimetica (DCAF), die zich richt op specifieke schadelijke antilichamen.

De ontwikkeling van DCAF-moleculen levert een belangrijke bijdrage aan de voortgang van gerichte therapie, waarvan is aangetoond dat ze het antilichaamafhankelijke versterkingseffect (ADE) in een Dengue-virus (DENV) infectiemodel elimineert en de acetylcholinereceptoractiviteit in een myasthenia gravis-model verhoogt. Hier beschrijven we een protocol voor de synthese van een DCAF-molecuul (DCAF1), dat selectief 4G2-antilichaam kan blokkeren om het ADE-effect te verzwakkentijdens Dengue-virusinfectie, en illustreren de binding van DCAF1 aan 4G2-antilichaam door een ELISA-test. In onze methode wordt DCAF1 gesynthetiseerd door de conjugatie van een hydrazinederivaat van een Fc-III-peptide en een recombinant tot expressie gebrachte lange α-helix met antigene sequentie door middel van inheemse chemische ligatie (NCL). Dit protocol is met succes toegepast op DCAF1 en andere DCAF-moleculen voor het richten van hun verwante antilichamen.

 

themoralbrain
themoralbrain

Peptiden ToAP3 en ToAP4 verminderen de afgifte van inflammatoire cytokines door TLR-4-blokkering.

Antimicrobiële peptiden (AMP’s) zijn kleine moleculen met microbicide en immunoregulerende activiteiten. In deze studie evalueerden we de ontstekingsremmende en antimicrobiële activiteiten van de peptiden ToAP3 en ToAP4, AMP’s van het gif van de Braziliaanse schorpioen Tityus obscurus. Om de activiteit van de peptiden te testen, werden van muizen beenmerg afgeleide macrofagen (BMDM’s) of dendritische cellen (BMDC’s) gestimuleerd met peptiden plus LPS om hun vermogen om de afgifte van cytokines en fenotypische markers te moduleren te analyseren.

Voor antimicrobiële analyse evalueerden we de indirecte activiteit tegen macrofaag-geïnternaliseerde Cryptococcus neoformans en directe activiteit tegen Mycobacterium massiliense. Onze gegevens tonen aan dat ze in staat waren om TNF-α- en IL-1 ranges -transcriptniveaus en eiwitniveaus voor BMDM en BMDC te verlagen. Bovendien is de reductie van TNF-α-secretie, vóór LPS-inflammatoire stimuli, geassocieerd met peptide-interactie met TLR-4. ToAP4 verhoogde de MHC-II-expressie in BMDC, terwijl ToAP3 co-stimulerende moleculen zoals CD80 en CD86 verlaagde.

Hoewel deze peptiden in staat waren om de productie van cytokinen en moleculen geassocieerd met antigeenpresentatie te moduleren, verhoogden ze het vermogen tot klaring van C. neoformans door macrofagen niet. In antimicrobiële analyse vertoonde alleen ToAP3 een krachtige werking tegen bacteriën. Al met al demonstreren deze resultaten een veelbelovend doelwit voor de ontwikkeling van nieuwe immunomodulerende en antibacteriële therapieën.

Antiangiogene vasculaire endotheliale groeifactor-blokkerende peptiden weergegeven op de capside van een infectieus oncolytisch parvovirus: assemblage en immuun-interacties.

Omdat veel tumorcellen vasculaire endotheliale groeifactoren (VEGF) synthetiseren die neovascularisatie en metastase bevorderen, dienen eerstelijns kankertherapieën vaak anti-VEGF (α-VEGF) antilichamen toe. Om het oncolytische parvovirus minute virus van muizen (MVM) op de tumorvasculatuur te richten, hebben we de functionele tolerantie bestudeerd, ontduiking van neutralisatieen inductie van α-VEGF-antilichamen van chimere virussen waarbij de voetafdruk van een neutraliserend monoklonaal antilichaam in de 3-voudige capside-piek werd vervangen door VEGF-blokkerende peptiden: P6L (PQPRPL) en A7R (ATWLPPR). Beide peptiden maakten replicatie van het virale genoom en nucleaire translocatie van chimere capside-subeenheden mogelijk. MVM-P6L vermeerderde zich efficiënt in kweek, waardoor het heterologe peptide op het capside-oppervlak werd blootgesteld en neutralisatie door het anti-spike monoklonale antilichaam werd vermeden.

Daarentegen leverde MVM-A7R lage infectieuze titers op en werd het slecht herkend door een α-A7R monoklonaal antilichaam. MVM-A7R vertoonde een gebrekkig assemblagepatroon, wat suggereert dat A7R een overgangsconfiguratie schaadde die de subeenheden in de 3-voudige as moeten ondergaan om de capside-schaal te sluiten. Het chimere MVM-A7R-virus evolueerde consequent in kweek tot een mutant die de P6Q-aminozuursubstitutie binnen de A7R-sequentie droeg, die de normale capside-assemblage en infectiviteit herstelde. In overeenstemming met deze bevinding werden anti-natieve VEGF-antilichamen bij muizen geïnduceerd door een enkele injectie van lege MVM-A7R-capsiden, maar niet door MVM-A7R-virionen. Deze fundamentele studie biedt inzichten om een ​​infectieus parvovirus te voorzien van immuun- antineovascularisatie en -ontwijking door een antilichaamvoetafdruk in de drievoudige as van capside te vervangen door VEGF-blokkerende peptiden, en het illustreert ook het evolutionaire vermogen van enkelstrengs DNA (ssDNA) virussen om geconstrueerde structurele beperkingen van capside te overwinnen.

BELANG Het  richten op de VEGF-signalering die nodig is voor neovascularisatie door vaccinatie met chimere capsiden van oncolytische virussen kan de therapie voor solide tumoren versterken. VEGF-blokkerende peptiden (VEbp) die in de drievoudige as van capside zijn ontwikkeld, gaven het infectieuze parvovirus MVM het vermogen om α-VEGF-antilichamen te induceren zonder adjuvans en om neutralisatie door MVM-specifieke antilichamen te omzeilen. Deze eigenschappen kunnen echter worden aangetast door structurele beperkingen die de capside oplegt aan de peptideconfiguratie en door verkeerde assemblage veroorzaakt door de heterologe peptiden. Het is important dat chimeer MVM-VEbp de structurele beperkingen oploste door mutaties te selecteren in de gemanipuleerde peptiden die de efficiënte capside-assemblage herstelden. Deze gegevens tonen de belofte aan van antineovascularisatievaccins met behulp van chimere VEbp-icosahedrale capsiden van oncolytische virussen, maar roepen ook veiligheidsproblemen op met betrekking tot de genetische stabiliteit van gemanipuleerde infectieuze parvovirussen bij kanker en gentherapieën.

Blokkeren van ontstekingsactivering veroorzaakt door β-Amyloïde Peptide (Aβ) en Islet Amyloid Polypeptide (IAPP) by way of een IAPP-nabootsing.

Ontsteking in de hersenen en alvleesklier is gekoppeld aan celdegeneratie en pathogenese van zowel de ziekte van Alzheimer (AD) als sort 2 diabetes (T2D). Ontstekingscascades in beide weefsels worden veroorzaakt door de opname van -amyloïde peptide (Aβ) of eilandjesamyloïde polypeptide (IAPP) aggregaten door microgliale cellen (AD) of macrofagen (T2D) en hun onvoldoende lysosomale afbraak. Dit resulteert in lysosomale schade, caspase-1/NLRP3- inflammasoomactivering en afgifte van interleukine-1β (IL-1β), een belangrijke pro-inflammatoire cytokine bij beide ziekten. Hier laten we zien dat de ontstekingsprocessen die worden gemedieerd door Aβ- en IAPP-aggregaten in microgliale cellen en macrofagen worden geblokkeerd door IAPP-GI, een niet-amyloïdogene IAPP-nabootser, die met beide polypeptiden oplosbare en niet-fibrillaire hetero-oligomeren met hoge affiniteit vormt.

In tegenstelling tot fibrillaire Aβ-aggregaten, worden niet-fibrillaire Aβ/IAPP-GI of Aβ/IAPP hetero-oligomeren snel geïnternaliseerd door microgliale cellen en gericht op lysosomen waar Aβ volledig is afgebroken. Internalisatie vindt plaats by way of IAPP-receptor-gemedieerde endocytose. Bovendien worden IAPP/IAPP-GI hetero-oligomeren , in tegenstelling tot IAPP-aggregaten, snel geïnternaliseerd en afgebroken in de lysosomale compartimenten van macrofagen. Onze bevindingen onthullen een voorheen onbekende functie voor de IAPP/Aβ-kruis-amyloïde interactie en suggereren dat omzetting van Aβ of IAPP in op lysosoom gerichte en gemakkelijk afbreekbare hetero-oligomeren door heteroassociatie met IAPP-nabootsers een veelbelovende benadering zou kunnen worden om specifiek amyloïde-gemedieerde ontsteking bij AD, T2D of beide ziekten.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *